Ứng dụng HPLC trong thực tế, Phân loại HPLC

HPLC viết tắt của sắc ký lỏng hiệu năng cao, tên tiếng anh là High Performance Liquid Chromatography, kiến thức về ứng dụng sắc ký lỏng hiệu năng trong thực tế mà mọi người cần biết

1. Khái niệm sắc ký lỏng hiệu năng (HPLC)?

Sắc ký lỏng hiệu năng cao là kỹ thuật để tách các chất có trong hỗn hợp thành từng chất riêng biệt trên sự tương tác giữa chất phân tích với 2 pha là pha động và pha tĩnh. Trong đó pha động thường là chất lỏng và pha tĩnh thường là các chất rắn. Các chất phân tích được pha động di chuyển qua pha tĩnh đứng yên.

Các thành phần trong mẫu khi tương tác với pha tĩnh mạnh hơn thì sẽ di chuyển chậm hơn so với các thành phần tương tác yếu.

2. Cấu tạo của máy sắc ký lỏng hiệu năng (HPLC)?

2.1 Bình chứa pha động

• Máy HPLC thường có 4 đường dung môi vào đầu bơm cao áp cho phép sử dụng cùng lúc 4 dung môi để rửa giải theo tỷ lệ mong muốn và tổng tỷ lệ là 100%.
• Tất cả dung môi HPLC đều phải sử dụng dung môi tinh khiết nhằm giảm cột sắc ký hay nhiễu đường nền.
• Pha động trong HPLC thường là hỗn hợp những thành phần chất lỏng phân cực và không phân cực với nồng độ tương ứng thay đổi tùy theo thành phần của mẫu.

2.2 Bộ khử khí Degases

Sử dụng bột khử khí nhằm loại trừ những bọt nhỏ còn sót lại trong dung môi pha động, tránh xảy ra các hiện tưởng như:

• Ở pha động, các đừng dung môi có tỷ lệ không đúng sẽ gây tình trạng biến đổi thời gian lưu của peak
• Trường hợp bọt quá nhiều, bọt khử khí không thể loại trừ hết thì bơm cao áp có thể không hút được dung môi, ảnh hưởng tới tần suất và hoạt động của cả hệ thống.
• Các trường hợp diễn ra đều có thể dẫn đến việc sai kết quả phân tích.

2.3 Bơm cao áp

Bơm cao áp có nhiệm vụ bơm pha động vào trong cột thực hiện quá trình chia tách sắc ký và phải đạt được áp suất khoảng 250 đến 600 bar, đồng thời tạo dòng liên tục. Lưu lượng bơm từ 0.1 – 10 ml/ phút.

2.4 Bộ phận tiêm mẫu

• Giúp đưa mẫu vào cột phân tích
• Thủ công và tự động là 2 cách để đưa mẫu vào cột

2.5 Cột sắc ký

• Được nhồi bằng những hạt silica hoặc silica lai.
• Nhiệt độ pha động và cột nên được giữ ổn định trong suốt quá trình vì vậy, trên thực tế còn có buồng điều nhiệt cột trong các hệ thống.

2.6 Đầu dò

• Là bộ phận giúp phát hiện các chất khi ra khỏi cột và cho những tín hiệu ghi trên sắc ký để có thể định tính, định lượng.
• Tùy thuộc vào tính chất của các chất phân tích mà người ta chọn loại đầu dò phù hợp.

2.7 Bộ phận ghi nhận tín hiệu

Dùng để ghi tín hiệu do đầu dò phát hiện.Đối với hệ thống HPLC hiện đại thì sẽ được phần mềm hệ thống ghi nhận và lưu thông số, sắc ký đồ cùng các thông số liên quan đến peak, thực hiện tính toán và xử lý thông số liên quan đến kết quả phân tích.

2.8 In dữ liệu

Sau khi đã phân tích xong, dữ liệu sẽ được in qua máy in đã kết nối với máy tính có cài phần mềm điều khiển.

3. Phân loại sắc ký lỏng hiệu năng?

Dựa vào sự khác nhau về cơ chế tách chiết có thể chia HPLC thành 4 loại:

• Sắc ký hấp thụ hay sắc ký lỏng rắn
• Sắc ký phân bố
• Sắc ký ion
• Sắc ký rây phân tử

Trong đó, sắc ký phân bố được ứng dụng nhiều nhất vì có thể phân tích được những hợp chất từ không phân cực đến những hợp chất phân cực.

4. Lợi ích của sắc ký lỏng hiệu năng

Những lợi ích chính của HPLC gồm:

• Điều khiển và tự động hóa các thiết bị sắc ký.
• Cung cấp tính năng quản lý dữ liệu, bảo mật, báo cáo và xác thực công cụ.
• Mạnh mẽ và dễ thích nghi
• Tăng năng suất bằng cách quản lý tất cả các lĩnh vực phân tích – từ mẫu đến thiết bị và từ phân tách đến báo cáo kết quả.
• Giá cả ổn định

5. Phạm vi ứng dụng của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng vào thực tế?

Mục đích chính của kỹ thuật HPLC là xác định, định lượng và tinh chế, phân tích hoặc hợp chất cụ thể. Và HPLC cũng hổ trợ trong việc tách hóa chất và tinh chế. Các ứng dụng khác của HPLC bao gồm:

Ứng dụng trong dược phẩm:

• Phân tích các hợp chất thuốc kháng sinh
• Kiểm soát chất lượng dược phẩm
• Kiểm soát sự ổn định của thuốc

Ứng dụng trong môi trường:

• Phân tích cái loại hóa chất hydrazine, formaldehyd, bisphenol A và các phân tử hữu cơ khác với độ chính xác cao đến một phần triệu.
• Theo dõi các chất ô nhiễm trong sinh học
• Phân tích các hợp chất phenolic trong nước uống.

Ứng dụng trong Pháp y

• Định lượng được thuốc trong các mẫu sinh học
• Xác định steroid trong máu,..
• Phân tích thuốc nhuộm dệt may về pháp y
• Xác định được các loại thuốc lạm dụng khác trong nước tiểu,..

Thức ăn và hương vị

• Đo lường chất lượng trong nước
• Phân tích đường trong nước ép
• Phân tích các hợp chất trong rau
• Phân tích các chất bảo quản

Ứng dụng trong xét nghiệm lâm sàng

• Phân tích kháng sinh trong máu
• Phân tích nước tiểu
• Phát hiện Neuropeptide nội sinh trong dịch ngoại bào của não.

Techtra LAB là tên gọi vắn tắt cho Công ty cổ phần Nghiên cứu Khoa học & Chuyển giao Công nghệ Techtra. Kinh doanh với nhiều lĩnh vực như chuyển giao công nghệ, dịch vụ kiểm định, phân tích định tính các hợp chất,…bằng phương pháp sắc ký, cung cấp các kiến thức hữu ích về sắc ký, ứng dụng trong thực tế.

Khách hàng cần tư vấn về sắc ký lỏng hiệu năng vui lòng liên hệ

Số hotline: 0376968518

Email: info@techtra.vn

Website: www.techtra.vn

Địa chỉ: Phòng 002, Tòa nhà I, Khu Công nghệ phần mềm Đại Học Quốc Gia, Số 3 Đường Võ Trường Toản, Phường Linh Xuân, Thành phố Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh.