Sắc ký cột và nguyên tắc, kỹ thuật triển khai sắc ký cột

1. Sắc ký cột là gì ?

Sắc ký cột là một phương pháp sắc ký phân tách và định lượng sinh chất dưới áp suất cao.

Giúp làm giảm thời gian nhưng vẫn hiệu quả, chất lượng khi phân tích. 

Sắc ký cột là phương pháp đơn giản có thể loại bỏ các nguyên liệu không phản ứng.

Phân lập các chất ra khỏi hỗn hợp nhanh chóng và hiệu quả ở trong các thí nghiệm các chất vô cơ, hữu cơ.

2. Nguyên tắc sử dụng ký sắc cột

Sắc kí cột được tiến hành dựa trên nguyên tắc tính phân cực.

Phân chia hỗn hợp các chất thành 2 pha là pha động và pha tĩnh để sắc ký.

Sắc ký hấp thụ là một ống thẳng đứng được làm bằng thủy tinh.

Pha tĩnh là chất hấp thụ – các chất phổ biến sử dụng làm pha tĩnh là oxit nhôm, silicagel, CaCO3,..

Được tiêu chuẩn hóa có sẵn trên thị trường, Pha động là dung môi rửa cột, chảy qua chất hấp thụ.

3. Kỹ thuật triển khai sắc ký cột

Bước 1:  Nhồi cột

Chọn cột, làm khô cột.

Cân silicagel cần dùng, pha dung môi chạy hệ và hòa tan silicagel vào dung môi đó trong một erlen.

Lấy một ít bông gòn nhồi dưới đáy cột dùng để chặn silicagel lại. Sau đó nhồi chặt vào cột.

Khi rót nên mở khóa để silicagel lắng đều, để 1 erlen bên dưới để thu hồi dung môi, rót thêm dung môi (từ erlen bên dưới) để ổn định hệ, chế nhiều lần đến khi hệ ổn định, khi đã ổn định khóa cột lại.

Bước 2: Nạp mẫu cần tách

Có 2 dạng nạp mẫu đó là nạp mẫu khô và nạp mẫu ướt.

Nạp mẫu ướt là hỗn hợp tan trong dung môi chạy cột nên chỉ cần cho mẫu vào.

Nạp mẫu khô:

Mẫu không tan thì phải hòa tan mẫu vào dung môi gián tiếp.

Dùng lượng ít silicagel để hấp thu mẫu, sau đó cho hết vào bình cô quay để cô quay đuổi dung môi đi thu được silicagel khô có chứa mẫu.

Nạp hết silicagel đó vào cột và cho dung môi chạy cột vào. Khi cô quay thì lót miếng bông gòn ở miệng bình cô quay để tránh silicagel bay lên.

Bước 3: Lót 1 miếng bông gòn ở trên mẫu chất để ổn định hệ rồi tiếp tục châm dung môi vào.

Từ từ thay đổi độ phân cực của hệ, lưu ý không được thay đổi đột ngột cũng như chuyển từ không phân cực sang phân cực rồi lại quay lại không phân cực.

Làm như vậy sẽ gãy cột và phải nhồi lại từ đầu, mất hết chất.

Bước 4: Mở khóa, lúc này cột bắt đầu tách chất.

Hứng lượng dung môi chảy ra có kèm theo chất đã tách vào ống nghiệm nhỏ.

Mỗi lần hứng khoảng 1/3 ống.

Sau đó đem chấm bản các ống, những ống có vệt tương tự nhau sẽ được gom lại, đó là 1 chất.

Làm như vậy thì cuối cùng thì sẽ tách được các chất mong muốn.

Nếu cho chảy chậm quá thì phải chờ lâu, nếu cho chảy nhanh thì silicagel chưa kịp tách đã phải cho ra chất

4. Phương pháp sắc ký cột tại Techtra LAB

Techtra LAB là tên gọi vắn tắt cho Công ty cổ phần Nghiên cứu Khoa học & Chuyển giao Công nghệ Techtra.

Kinh doanh với nhiều lĩnh vực như chuyển giao công nghệ, dịch vụ kiểm định, phân tích định tính các hợp chất,…bằng phương pháp sắc ký. Trong đó còn có phương pháp sắc ký cột.

Khách hàng cần tư vấn về phương pháp sắc ký lỏng vui lòng liên hệ:

Hotline: 0376968518

Email: info@techtra.vn

Website: www.techtra.vn

Địa chỉ: Phòng 002, Tòa nhà I, Khu Công nghệ phần mềm Đại Học Quốc Gia, Số 3 Đường Võ Trường Toản, Phường Linh Xuân, Thành phố Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh.