About Us

Phương pháp tiến hành, phân tích sắc ký lớp mỏng

1. Sắc ký lớp mỏng là gì ?

Có rất nhiều kỹ thuật sắc ký sắc nhau. Trong đó sắc ký lớp mỏng chính là kỹ thuật tách những hợp chất cái mà được thực hiện khi cho pha động di chuyển đến. 

Sau đó đi qua pha tĩnh trên đó đã được đặt các chất được tích hợp lại những chất cái mà cần được tách.

Trong đó pha tĩnh là chất hấp phụ trải thành lớp mỏng, được đặt cố định trên phiến kim loại/ nhựa/ phiến kính (thường được làm từ silica gel, cellulose hoặc aluminium oxide).

Còn pha động là một hệ gồm một dung môi riêng lẻ hoặc cũng có thể hỗn hợp các dung môi. Cũng như những dung môi trên sẽ được phối hợp nhịp nhàng cùng nhau, cái mà được tuân theo một tỷ lệ quy định trước đó, sau đó được hút lên bản sắc ký từ mao dẫn. 

Sắc ký lớp mỏng

2. Nguyên tắc hoạt động của sắc ký lớp mỏng

Nguyên tắc hoạt động của sắc ký lớp mỏng là sự phân tách. Dựa vào các ái lực tương đương giữa những hợp chất so với hai pha. 

Mức di chuyển của chất phân tích có đại lượng đặc trưng cho mức độ di chuỵển của chất phân tích là Rf (hệ số di chuyển). Nó được tính bằng công thức sau: Rf = a/b

Giải thích: 

a chính là khoảng cách tính từ điểm xuất phát đến tâm vết mẫu thử.

b cái mà sẽ được tính từ những khoảng cách bằng điểm xuất phát tới lượng dung môi cùng trên hướng đường đi cái mà vết sở hữu.

Đặc biệt Rf chỉ có giá trị từ 0 đến 1.

3. Cách tiến hành phân tích sắc ký lớp mỏng.

3.1. Dụng cụ

Bình triển khai bằng thuỷ tinh trong suốt có kích thước phù và có nắp đậy kín.

Ðèn tử ngoại, phát các bức xạ có bước sóng 254 nm và 365 nm.

Dụng cụ để phun thuốc thử.

Tủ sấy điều nhiệt để hoạt hóa, còn dùng để sấy bản mỏng và sắc ký đồ.

Tủ hút hơi độc.

Máy sấy khô sắc ký đồ và chấm nhanh nhiều lần những dung dịch pha loãng chất cần phân tích.

Máy ảnh để chụp lưu giữ sắc ký đồ ở ánh sáng ban ngày. 

Các ống mao quản, Micropipet nhiều cỡ hoặc dụng cụ thích hợp.

Chuẩn bị thêm bản mỏng tráng sẵn chất hấp phụ có chất phát quang thích hợp.

dụng cụ sắc ký lớp

3.2. Chuẩn bị bản mỏng.

Sắp xếp các bản mỏng và chuẩn bị thiết bị: Các phiến kính phải được lau kỹ lưỡng và tẩy sạch các chất béo bằng cách ngâm trong dung dịch sulfocromic.

Tiếp đến, cọ sạch bằng bàn chải dưới tia nước máy rồi tráng nước cất và sấy khô trên giá ở nhiệt độ thường hoặc nhiệt độ trong tủ sấy.

3.3. Ðiều chế vữa của chất hấp phụ

Chất hấp phụ được lựa chọn để phù hợp yêu cầu phân tích. Cho 25g silicagel G trộn cùng 50 ml nước cất, sau đó nhào trong cối (hoặc lắc mạnh trong bình nón, nút kín) khoảng 30 – 45 giây. 

Dịch treo tạo được ở dạng lỏng và đồng nhất, sau đó sẽ se lại trong vài phút do có bột bó. Đổ dung dịch vào thiết bị trải đã điều chỉnh độ dày cho bản mỏng. Ðể các phiến kính tầm 10 phút tới khi mặt trên hết bóng.

3.4. Hoạt hóa

Cho các bản mỏng sau khi khô mặt vào tủ sấy (105 – 110 độ c) và sấy 30 phút. Sau đó để nguộibảo quản trong bình hút ẩm.

Đến khi cần sử dụng, nếu cần thì hoạt hóa lại (sấy ở 105-1100 độ C) trong 1 tiếng, xong thì cạo bỏ một dải mỏng chất hấp phụ dọc hai bên cạnh của tấm kính.

3.5. Chuẩn bị bình khai triển

Các bình khai triển dung môi là bình thủy, nắp đậy kín. Sau khi pha dung môi pha động theo tỷ lệ quy định, cần tiến hành bão hòa dung môi. 

Với phương thức  lót giấy lọc xung quanh thành trong bình để giấy lọc thấm đều dung môi. 

Lượng dung môi dùng sẽ cần phải cân nhắc để sau khi bão hòa còn một lớp (khoảng 5-10mm) dưới đáy bình. 

Ðậy nắp bình, để yên 1 tiếng với nhiệt độ 20 – 25 độ C. Phải sử dụng dung môi tinh khiết dùng cho sắc ký để thu được kết quả chuẩn nhất.

3.6. Chấm chất phân tích lên bản mỏng

Lượng chất đưa lên bản mỏng ảnh hưởng lớn đến trị số Rf. Lúc ấy, vết các chất có trị số Rf gần nhau sẽ bị chồng lên nhau. 

Lượng chất nhỏ quá sẽ không thể  phát hiện được do độ nhạy của thuốc thử không đủ lớn. Với dung dịch nồng độ loãng thì chấm nhiều lần cùng một vị trí và sấy khô sau mỗi lần. 

Ðường xuất phát cách mép dưới bản mỏng (1,5– 2 cm), cách bề mặt trên dung môi (khoảng 0,8 – 1 cm). Các vết chấm nhỏ, đường kính 2 – 6 mm, cách nhau khoảng 15 mm. 

Các vết chấm các lần khác nhau càng trùng sẽ nhau càng tốt. Do đó, những trường hợp phân tích phải dùng các mao quản định mức chính xác.

3.7. Triển khai sắc ký

Ðặt bản mỏng đứng yên so kè cùng với bình triển khai, những vết chấm phải nên được nằm trên cùng bề mặt của lớp dung môi cái mà sẽ được khai triển kế đó. 

Giữ bình kín để không khí không lọt vào sau đó giữ yên ở nhiệt độ nguyên bản. 

Đến khi dung môi được thực hiện trên cùng một bản mỏng, kế đến chúng ta lấy bản mỏng ra khỏi bình, kí hiệu cho mức dung môi. 

 Cho chúng bay hơi dung môi cái mà vẫn đang còn đọng lại trên bản mỏng rồi hiện vết theo chỉ dẫn trong chuyên luận riêng.

3.8. Đánh giá

Xem xét những vết xuất hiện trên, sau đó hãy tính giá trị Rf hay Rr, tiếp đến tiến hành việc định tính, nhận ra các tạp chất hay định lượng tương tự quy định ở chuyên luận riêng.

4. Techtra trong việc nghiên cứu sắc ký lớp mỏng

Techtra LAB là tên gọi vắn tắt cho Công ty cổ phần Nghiên cứu Khoa học & Chuyển giao Công nghệ Techtra. Đây cũng là một trong những đơn vị uy tín và chất lượng trong lĩnh vực phân tích sắc ký và nghiên cứu các kỹ thuật phân tích sắc ký vô cùng đa dạng.

Khách hàng cần tư vấn và báo giá về dịch vụ sắc ký  tại Techtra LAB xin vui lòng liên hệ:

Số hottline: 0376 968 518

Email: info@techtra.vn

Website: www.techtra.vn

Địa chỉ: Phòng 002, Tòa nhà I, Khu Công nghệ phần mềm Đại Học Quốc Gia, Số 3 Đường Võ Trường Toản, Phường Linh Xuân, TP Thủ Đức, TPHCM.

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai.

Website này sử dụng Akismet để hạn chế spam. Tìm hiểu bình luận của bạn được duyệt như thế nào.

Gọi ngay