Cách tiến hành phương pháp sắc ký lớp mỏng

Ngày nay, phương pháp sắc ký lớp lớp mỏng rất phổ biến và đóng vai trò rất quan trọng trong việc nghiên cứu và được ứng dụng phổ biến trong nhiều rất lĩnh vực.

Để hiểu rõ hơn hãy xem qua bài viết dưới đây, Techtra sẽ giải đáp cho các bạn tất cả thắc mắc về phương pháp này nhé.

1. Sắc ký là gì?

Sắc ký trong tiếng Anh là chromatography. Trong lĩnh vực khoa học và nghiên cứu thì sắc ký được biết đến là một trong các kỹ thuật phòng thí nghiệm dùng để phân tách các hoạt chất ra khỏi hợp hỗn dựa trên sự phân bố liên tục của chúng giữa hai pha, trong đó một pha không chuyển động và một pha chuyển động dịch chuyển qua pha tĩnh theo một phương hướng duy nhất và nhất định.

2. Phương pháp sắc ký lớp mỏng là gì?

Phương pháp sắc ký lớp lớp mỏng là kỹ thuật sắc ký được sử dụng trong việc tách các chất trong hỗn hợp trong phòng thí nghiệm.

Phương pháp sắc ký lớp lớp mỏng sẽ bao gồm:

Pha tĩnh thực chất là các chất hấp phụ, thường là các Silic điôxít, aluminium oxit, hoặc cellulose với một lớp mỏng được phủ trên một mặt phẳng chất trơ. 

Pha động bao gồm các hỗn hợp dung dịch.

Các hỗn hợp dung dịch này cần phân tích được hòa tan trong một dung môi phù hợp và được hút lên bản sắc ký bởi mao dẫn.

Giúp tách các hỗn hợp dung dịch trong thí nghiệm dựa trên tính phân cực của các thành phần trong hỗn hợp dung dịch.

3. Ưu và nhược điểm của phương pháp sắc ký lớp mỏng

• Đây là một phương pháp đơn giản với tiết kiệm được thời gian và thực hiện nhanh chóng.
• Giúp hình dung và nhận diện, xác định được các hợp chất cô lập nhau.
• Giúp tách biệt được hầu hết các hợp chất.
• Quá trình tách diễn ra nhanh và mức độ chọn lọc đối với các hợp chất cao hơn.
• Giúp đánh giá dễ dàng các tiêu chuẩn về độ tinh khiết của mẫu đã cung cấp.
• Đây là phương pháp sắc ký tiết kiệm ít gây tốn kém

4. Cách tiến hành phương pháp sắc ký lớp mỏng?

4.1 Công cụ

• Chuẩn bị bình bằng thuỷ tinh trong suốt và có kích thước thích hợp với bản mỏng và có nắp được đậy kín.
• Chuẩn bị đèn tử ngoại. Đèn tử ngoại sẽ có hai bước sóng là 254 nm và bước sóng là 365 nm.

• Chuẩn bị tủ sấy điều hoà nhiệt để làm gia tăng thêm khả năng hoạt động về mặt hoá học của bản mỏng và sắc ký đồ.
• Tủ hút để hút hơi độc.
• Chuẩn bị máy sấy dùng để sấy khô sắc ký đồ và dùng để chấm nhanh chóng nhiều lần những hỗn hợp dung dịch cần để phân tích.

• Chuẩn bị một máy ảnh phù hợp để chụp lưu giữ trạng thái sắc ký đồ khi ở ánh sáng ban ngày.
• Chuẩn bị ống mao quản và Micropipet nhiều kích cỡ hoặc các dụng cụ thích hợp cho việc tiến hành.
• Bản mỏng đã được tráng sẵn các chất hấp phụ trên bề mặt.

4.2 Chuẩn bị bản mỏng

• Ðiều chế chất hấp phụ: Chất hấp phụ sẽ được chọn lọc thích hợp với yêu cầu phân tích như: điôxit silic, xenlulôzơ, Oxide nhôm. Trong số đó điôxit silic được dùng thông dụng nhất. Sau khi hoà lẫn thành một dung dịch, dung dịch này sẽ trải lên một bản mỏng và căn chỉnh với độ dày phù hợp. Sau đó, để các lam kính nguyên tại một vị trí đến khi mặt trên hết bóng, hoặc có thể để dung dịch khô qua đêm tại nhiệt độ phòng.
• Hoạt hóa: Cho các bản mỏng đã khô vào tủ sấy và đặt nhiệt độ 105 -110C trong 30 phút. Lấy ra và bảo quản để nguội bên trong bình hút ẩm.

4.3 Chuẩn bị khai triển

Chuẩn bị bình triển khai dung môi là một bình thủy tinh có kiểu dáng hình trụ tròn hay hình hộp chữ, có nắp đậy kín.

 Sau đó, trộn lẫn dung môi pha động theo tỷ lệ được quy định và tiến hành bão hòa dung môi. 

Cần lót miếng giấy lọc chiếc bình xung quanh thành trong. Sau đó, đợi để miếng giấy lọc thấm được đều dung môi

Lượng dung môi được sử dụng cần cân đo và điều chỉnh sao cho sau khi bão hòa sẽ còn một lớp dày dung môi còn đọng khoảng 5mm đến 10mm đáy bình. 

Ðậy nắp bình kín và giữ nguyên trạng trong 1 giờ ở nhiệt độ 20 – 25 độ C. 

Lưu ý nếu muốn thu được kết quả chính xác nhất khi tiến hành thì nên dùng những dung môi thật tinh khiết.

4.4 Chất chấm phân tích trên bản mỏng

Có ảnh hưởng lớn đến trị số Rf với lượng chất đưa lên bản mỏng.

Nếu sử dụng lượng chất quá nhiều sẽ làm cho vết sắc ký to và kéo dài.

Khi đó, sẽ xảy ra tình trạng chồng lên nhau giữa vết các chất có trị số Rf gần nhau.

Nếu lưu lượng chất quá nhỏ thì sẽ không thể phát hiện được do độ nhạy của thuốc thử không đủ. 

Chấm nhiều lần cùng một vị trí và sấy khô sau mỗi lần với một lượng dung dịch có nồng độ loãng

Ðường xuất phát cách mép dưới bản mỏng 1,5cm – 2 cm và cách bề mặt trên dung môi từ 0,8 – 1 cm. 

Các vết chấm nhỏ, đường kính 2 – 6 mm và cách nhau khoảng 15 mm. 

Các vết chấm ở các lần khác nhau càng trùng nhau càng tốt. 

Do đó, với những trường hợp phân tích phải dùng các mao quản định mức chính xác.

4.5 Triển khai sắc ký

Lúc này cần đặt bản mỏng ở trạng thái gần như thẳng đứng bên trong bình triển khai. 

Vết chấm dung dịch bắt buộc phải nằm trên bề mặt lớp dung môi được triển khai. 

Nằm bình cần được đậy kín, giữ nguyên và bảo đảm cho nhiệt độ không đổi.

Khi dung môi hoạt động trên bản mỏng theo hình thức và quy tắc trong chuyên luận, lúc này ta cần lấy bản mỏng ra. 

Lúc này sẽ xác định mức dung môi và đánh dấu lại, làm bay hơi lượng dung môi còn dính trên bản mỏng

Tiếp theo hiện màu theo hướng dẫn đã hình thức và quy tắc trong chuyên luận riêng.

5. Các ứng dụng của phương pháp sắc ký lớp mỏng?

Phương pháp sắc ký lớp mỏng được ứng dụng khá phổ biến và rộng rãi trong nhiều lĩnh vực:

• Giúp xét nghiệm các hóa chất phóng xạ trong dược khoa độ tinh khiết 
• Giúp xác định trong tế bào thực vật chứa bao nhiêu lượng sắc tố
• Phát hiện thuốc trừ sâu, thuốc diệt côn trùng trong thức ăn, hoặc để nhận biết hóa chất trong một chất có sẵn.
• Nhận diện những thành phần hóa chất trong một mẫu cho sẵn
• Giám sát các phản ứng hữu cơ

6. Những đơn vị thực hiện phương pháp sắc ký lớp mỏng uy tín tại TP. HCM

Công ty Cổ Phần Nghiên cứu Khoa Học & Chuyển Giao Công Nghệ Techtra là công ty chuyên cung cấp dịch vụ kiểm nghiệm, kỹ thuật sắc ký, phương pháp sắc ký lớp lớp mỏng. Sẵn sàng đáp ứng các chỉ tiêu theo quy định và giảm thiểu chi phí cho khách hàng.

Khách hàng cần tư vấn và báo giá về dịch vụ tại Techtra LAB xin vui lòng liên hệ:

Địa chỉ: Số 3 Đường Võ Trường Toản, Phường Linh Xuân, TP. Thủ Đức, TP. Hồ Chí Minh

Website: https://techtra.vn/

Hotline: 0376 968 518

Email: info@techtra.vn